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免疫CRISPR检测有助于早期诊断肾移植排斥反应

医学研究 2022-12-12 21:51:01

Credit: CC0公共域 当患者接受肾脏移植时,医生会通过包括活检在内的多种方式仔细监测他们是否有排异迹象

然而,这种方法是侵入性的,只能在后期发现问题

现在,发表在《分析化学》杂志上的研究人员开发了一种基于CRISPR的检测方法,可以灵敏、无创地检测尿液中急性肾脏排斥反应的生物标志物

这可能有一天有助于更早地诊断排斥反应,而无需活检

肾移植受者必须在余生服用免疫抑制药物,以帮助他们的免疫系统免受外来器官的攻击

然而,肾脏排斥仍然会发生,尤其是在移植后的最初几个月,这就是所谓的急性排斥

症状包括血清肌酐水平升高以及肾脏疼痛和发烧等症状

目前,明确诊断的唯一方法是通过活组织检查,但这种方法只能在相对较晚的阶段发现问题

能够在早期敏感且无创地诊断肾脏排异反应将使医生能够更快地开始抗排异药物治疗

研究人员此前发现,肾移植患者尿液中高水平的细胞因子蛋白CXCL9是排斥反应的早期预警信号

但是目前测量CXCL9的方法(一种酶联免疫吸附试验,或称ELISA)在尿液中效果不佳,限制了它的灵敏度

因此,乔纳森·多迪克和他的同事们想开发一种更敏感的技术,用于非侵入性诊断尿液中的急性肾脏排斥反应

研究人员将他们的检测方法建立在CRISPR/Cas12a基因编辑技术的基础上

在CXCL9蛋白的存在下,CRISPR/Cas12a酶切割探针以产生荧光信号

研究人员通过附着一个聚集了大量CRISPR/Cas12a分子的DNA条形码增强了荧光信号,并随后与识别CXCL9的抗体结合

重要的是,与其他基于CRISPR的检测方法不同,不需要PCR扩增,这使得该方法更容易适应可以在医生办公室甚至患者家中使用的设备

当对11名肾移植患者的尿液样本进行测试时,新系统准确测量了CXCL9水平,其值与酶联免疫吸附试验非常相似

然而,研究人员说,因为免疫CRISPR系统比酶联免疫吸附试验大约灵敏7倍,它可能能够在很早的阶段检测到肾移植排斥反应

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