Credit: Pixabay/CC0公共领域 美国伯明翰大学的研究人员
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,证实了一种新颖、高度灵敏的新冠肺炎测试方法的速度、准确性和简单性,该方法可部署在娱乐场所、机场到达终端以及没有临床测试实验室的远程环境中
科学家们使用了一项三方对比研究来证实指数扩增反应(EXPAR)方法与目前在医院环境中使用的PCR和LAMP测试一样灵敏,但速度更快
伯明翰新冠肺炎测试,称为RTF-EXPAR,给出的样本到信号的时间不到10分钟,即使是低病毒水平,目前的横向流动测试不太有效
生物科学学院的蒂姆·达福恩教授和化学学院的吉姆·塔克教授与研究生杰克·卡特、癌症和基因组科学研究所的安德鲁·贝格斯教授合作进行了这项研究,研究结果于今天在PNAS发表
聚合酶链反应和LAMP检测都可以检测到病毒RNA,这种RNA在口腔和鼻子的拭子中含量极低
这些测试采用两步过程,首先将核糖核酸转化为脱氧核糖核酸(这一过程称为反转录),然后多次“放大”材料,以便在样品中检测到
蒂姆·达福尔教授说:“与没有这些步骤的抗原检测(如侧向流动)相比,逆转录和扩增步骤都减慢了基于核酸检测的现有COVID检测
然而,虽然这使得横向流动测试比基于PCR和LAMP的测试更快,但作为回报,它们通常不太敏感
一个理想的测试应该是足够灵敏和快速的——我们的测试,叫做RTF-EXPAR,实现了这个目标
RTF-EXPAR通过两种方式实现了这一壮举——首先,检测团队设计了一个新的RNA到DNA的转换步骤,避免了逆转录,使其免于逆转录(RTF)
其次,他们产生读出信号的扩增步骤使用EXPAR,一种替代PCR和LAMP的DNA扩增过程
达福恩教授补充道:“EXPAR在单一温度下扩增DNA,从而避免了PCR中冗长的加热和冷却步骤
然而,虽然LAMP也使用单一温度进行扩增,但EXPAR是一个更简单、更直接的过程,其中扩增的链要小得多
这使得EXPAR不仅比PCR更快,而且比LAMP更快
" 研究显示,RTF-EXPAR方法在不到10分钟的时间内将10股以下的RNA转化为数十亿份的DNA,使用的一锅法与比当前测试方法更基本的台式设备兼容
RTF-EXPAR在信号检测时间上也比基于PCR和LAMP的检测有显著的改进
在低浓度的核糖核酸(7
25份/升),信号检测时间为42
67 ( 0
聚合酶链反应47分钟,11
25 ( 0
LAMP为20分钟,8分钟
75 ( 0
EXPAR分钟
在高(1450拷贝/升)病毒核糖核酸浓度下,信号检测时间为34
00 ( 0
00)分钟进行聚合酶链反应,11
25 ( 0
20)分钟用于LAMP,和3
08 ( 0
EXPAR分钟
最佳序列的鉴定显然是开发EXPAR方法的重要一步,研究中检测到的序列来自新型冠状病毒基因组中的Orf1ab基因,已被证明在所有当前的COVID变体中都是保守的
然而,如果出现新的变异,RTF-EXPAR方法可以快速适应,或者用于检测其他病毒病原体,如流感、呼吸道合胞病毒(RSV)或埃博拉病毒,这些病毒需要在患者附近进行检测,以防止更广泛的传播
这项检测已经在伯明翰大学的外科研究实验室进行了测试
安德鲁·贝格斯教授的团队进行了测试,他评论道:“测试使用了包含大流行期间常见的典型病毒载量范围的拭子,并且有6分钟的截止时间
分析显示RTF-EXPAR的灵敏度与定量PCR检测相当,阳性预测值为89%,阴性预测值为93%
我们希望在不久的将来公布这项测试的全部结果
" 该团队现在正在寻求快速许可的商业合作伙伴,以尽可能广泛地提供RTF-EXPAR测试
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