爱媛大学 可溶性BAC交联凝胶能够快速无损地回收通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质生物标记物，并便于通过质谱分析
学分:美国化学学会蛋白质组研究杂志 聚丙烯酰胺凝胶电泳能够对从生物样品中提取的蛋白质进行高分辨率分离，但需要一天以上的预处理才能回收凝胶中截留的分离蛋白质，以便通过质谱进行检测
BAC-DROP是我们的新型电泳技术，它使用了一种可溶解的聚丙烯酰胺凝胶，可以在大约五个小时内完成样品预处理
开发的技术将能够快速诊断病毒和疾病蛋白标志物
质谱是生物标记物分析的一种强有力的方法，因为它能够对临床样品中的目标分子进行高度灵敏和准确的测量
代谢综合征在临床诊断中的应用，如新生儿代谢筛查，一直以代谢物标志物为重点
蛋白质的质谱测量目前主要用于新标记物发现研究，但作为免疫测定的替代方法，其在临床标记物诊断中的应用越来越受到关注
基于质谱的蛋白质生物标记物的定量主要通过自下而上的方法进行，该方法使用通过用胰蛋白酶酶促蛋白质消化获得的肽片段
标准消化方案要求反应时间超过20小时，这是样品制备工作流程中的一个限速因素
尽管质谱对蛋白质的定量非常敏感，但血浆和血清蛋白质组非常复杂，其他组分的干扰也是一个重大挑战
对于目标标记物的高精度检测，已经报道了使用抗体柱预去除主要血清蛋白成分如白蛋白或选择性富集目标标记物的方法，但是对定量结果的非目标效应和处理多个样品的困难仍然是障碍
在这项研究中，我们集中在可溶性聚丙烯酰胺凝胶使用氮，氮’-双(丙烯酰基)胱胺(BAC)作为交联剂来解决这些问题
BAC交联的聚丙烯酰胺凝胶通过还原处理很容易溶解，允许回收逃逸到溶液中的蛋白质
我们发现回收的蛋白质适合于在高温条件下进行快速胰蛋白酶消化，并且我们成功地建立了用于基于质谱的生物标记物定量的高通量样品制备方法，我们将其命名为BAC-DROP(BAC-Gel Dissolution to Digest PAGE-Resolved Objective Proteins)
高分辨率蛋白质组分离技术对临床样品中痕量标记蛋白的质谱定量特别有效
通过在基于质谱的炎症生物标志物C-反应蛋白的定量工作流程中引入BAC-DROP，我们能够在仅5小时内完成样品预处理，并成功地从0
5升人血清样本
我们还成功地通过乙型肝炎表面抗原定量结合生物活性炭吸附和质谱进行了乙型肝炎病毒(HBV)感染的血清学诊断
最近，对病毒感染的质谱诊断的兴趣迅速增加，例如新冠肺炎的诊断
本研究中采用的高通量生物活性炭滴样方法不仅适用于HBV，也适用于其他传染性病毒性疾病样品
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