基础科学研究所 图1
从小鼠脾脏中分离出脾细胞，用磁激活细胞分选法分离出T细胞和B细胞
随后将细胞接种在384个孔中，并使用DOFLA筛选超过10，000种不同的荧光分子
B)荧光显微镜图像显示CDgB染色的是B细胞而不是T细胞
C)流式细胞术显示T细胞和B细胞群体间CDgB荧光与SSC的关系
学分:基础科学研究所 人的血液包含几种不同的成分，包括血浆、红细胞、白细胞和血小板
其中，白细胞分为许多亚类，每个亚类都有独特的功能和特征，如淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞等
淋巴细胞进一步细分为淋巴细胞、淋巴细胞和自然杀伤细胞
区分和分离不同类型的这些细胞在免疫学领域的研究中是非常重要的
区分不同的免疫细胞类型通常是通过流式细胞术和荧光激活细胞分选(FACS)来完成的，它们可以根据细胞的大小、粒度和荧光来识别不同的细胞群
虽然尺寸和粒度本身不能区分具有相似物理参数的细胞，但不同类型的免疫细胞在细胞表面显示出不同的免疫受体组合
例如，淋巴细胞和淋巴细胞分别表达CD3和CD19
因此，荧光识别免疫细胞依赖于使用针对不同受体的多种抗体对细胞进行染色
长期以来，人们一直认为不使用这些抗体就不可能区分不同的免疫细胞类型
然而，韩国基础科学研究所自组装和复杂性中心的科学家们进行的新的突破性研究可能已经改变了这一点
研究人员采用了一种面向多样性的荧光文库方法，利用从小鼠脾脏中分离出的B和T淋巴细胞筛选了10，000多种不同的荧光分子。
由此，他们设法发现了一种新的荧光探针，这种探针可以在没有细胞受体靶向抗体的情况下区分B淋巴细胞和T淋巴细胞
图2
CDgB分子的结构
游离的未结合的CDgB在溶液中形成聚集体，当它们结合到脂质膜上时解离
学分:基础科学研究所 研究人员称新探针为CDgB，代表B淋巴细胞的绿色标志化合物
CDgB是一种亲脂性分子，它含有一种附着在烃链上的荧光成分
由于CDgB含有极性荧光基团和烃尾，这意味着游离的未结合的CDgB染料分子在溶液中形成类似胶束的聚集体，并表现出低水平的背景荧光
然而，当它们附着到细胞表面时，聚集体解离并导致荧光信号的尖峰
此外，染料的亲脂性意味着染料不与蛋白质靶结合，而是直接定位于脂质膜结构
据研究人员称，这是“第一个报道这种细胞区分机制的例子
" 图3
甲)B细胞和T细胞膜脂组成的差异
B) CDgB选择性地染色B细胞的脂膜，B细胞具有较短的聚碳酸酯链长度和较低的胆固醇百分比
C) CDgB在未成熟B细胞(CDgB++)中显示出比成熟B细胞(CDgB+)或其他淋巴细胞(CDgB-)更高的荧光
学分:基础科学研究所 CDgB能够选择性地靶向B淋巴细胞的细胞膜，而不是T淋巴细胞或自然杀伤细胞。
研究人员试图通过测试具有4到20个碳的不同烃链长度的分子的不同衍生物来优化CDgB的选择性
发现具有14至18个碳的CDgB衍生物对B淋巴细胞显示出最高的选择性，C18显示出最好的结果
当碳长度超过20时，通过荧光来区分细胞变得更加困难
碳长度在选择性中起重要作用的事实提示，这种机制依赖于B淋巴细胞和T淋巴细胞膜结构的差异
研究人员通过对B和T细胞膜进行脂质组学分析，进一步阐明了这一机制
磷脂酰胆碱占淋巴细胞和淋巴细胞膜磷脂的大部分(> 60%)
结果发现，一般来说，淋巴细胞比淋巴细胞具有更短的增殖细胞核抗原
此外，T淋巴细胞的膜胆固醇含量比B淋巴细胞高约两倍
这些因素使B淋巴细胞具有更“灵活”的细胞膜，这被认为是解释为什么CDgB分子比T淋巴细胞更容易附着在B淋巴细胞的细胞膜上的关键因素。
即使在B淋巴细胞中，也发现荧光强度基于细胞成熟度而不同
B细胞祖细胞和未成熟B细胞比成熟B细胞发出更亮的荧光信号，这很可能是由于未成熟细胞中更高的膜柔韧性
研究人员进一步得出结论，这种新的脂质导向的活细胞区分机制可以补充现有的细胞区分机制，以提高我们从不同细胞的复杂混合物中区分特定细胞类型的能力
这项研究发表在美国化学学会杂志上
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