作者:朱利叶斯-马克西米利安-维尔茨堡大学 花青染料Alexa Fluor 647 (a)和CF660C (b)以及碳罗丹明染料ATTO647N (c)在568纳米(nm)光激发下涂覆的玻璃表面的共焦荧光图像
通过在特定区域(负像右上)激发640纳米的红色吸收染料,染料在那里被光转换,并且可以在568纳米激发并在大约580纳米发出荧光的表面上书写字母
碳罗丹明染料显示出比花青染料更有效的光致发蓝
学分:马库斯·索尔团队/维尔茨堡大学 荧光显微术的最新发展使得以高达20纳米的空间分辨率对细胞或分子复合体中的单个分子成像成为可能
然而,在某些情况下,会出现一种效应,这种效应会伪造结果:使用的激光会导致样品中形成非常活泼的氧分子
这些会破坏所用的荧光染料,使其不再发出荧光
在显微镜专家中,这种效应被称为光漂白
然而,各种荧光染料也可以通过光漂白来转化,以便它们吸收较短波长的光
“以前的红色荧光染料会发出绿光
它的荧光在波长范围上向蓝色范围移动
这就是为什么这种效应被称为照相蓝,”马库斯·绍尔教授解释说,他是德国巴伐利亚州维尔茨堡大学(JMU)朱利叶斯-马克西米利安生物中心的超分辨率显微镜专家
照相制版的第一个准确描述 索尔的团队现在在《自然方法》杂志上首次提出了像Cy5这样的花青染料光致发蓝的确切分子机制
医生
弗雷德里克癌症研究中心的马丁·施勒曼说
S
)也参与了出版
马库斯·绍尔说:“因为我们非常准确地理解了这一机制,所以我们能够通过简单的添加剂如维生素C来防止光致发蓝,或者通过添加一种催化剂来增加光致发蓝。”
防止照片发蓝非常重要
虽然这种影响只能影响所用染料的百分之几,但它仍然会导致显微镜检查的错误或误解,例如在能量转移实验中
这是因为转化的染料以与起始产物相同的高灵敏度被检测到
简单的缓冲液可防止照片发蓝 “我们的结果显示了哪些染料受到了影响,以及简单的缓冲剂添加是如何防止光致发蓝的,”索尔在谈到《自然方法》的内容时说
“但是它们同样显示了光致发蓝是如何被有利地用于荧光成像和追踪单一的、特定转换的染料分子的
" 这正是绍尔的团队下一步计划解决的问题:光蓝技术将被进一步开发,用于在感染过程中有针对性地跟踪单个细菌和病毒粒子
这里描述的工作是由德国研究基金会DFG资助的
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