爱媛大学
使用传统方法需要20多个小时的样品制备，现在使用AnExSP只需不到5个小时即可完成
学分:化学通信，DOI: 10
1039/D1CC05529A 质谱是一种广泛用于医学和农业的优秀蛋白质分析方法，但它需要复杂和耗时的样品制备
在这项研究中，我们开发了一种新的方法，使用阴离子交换固相萃取旋转柱，可以显著减少制备时间，该柱可以由容易获得的材料制成
这种新的可靠方法不需要高度专业化的实验室技术，并且能够从痕量细胞和组织样品中进行可再现的质谱分析
近年来，利用质谱技术全面研究生物样品中蛋白质组分的蛋白质组学研究已经非常流行
为了通过质谱法检测蛋白质，有必要提取细胞中包含的蛋白质成分，并用蛋白酶消化它们至易于通过质谱法分析的肽大小
以这种方式消化蛋白质通常需要20小时或更长的反应时间
十二烷基硫酸钠(SDS)是一种常用于蛋白质提取过程的表面活性剂，会干扰质谱分析和蛋白质消化，必须在分析前彻底去除
然而，这一过程是有代价的，即样品损失
为了克服这些挑战，我们开发了一种创新的样品制备方法，AnExSP(阴离子交换盘辅助顺序样品制备),它使用微升大小的旋转柱，在称为StageTip的移液器吸头中安装阴离子交换固相萃取盘，作为蛋白质消化的工具
我们成功地在最少60分钟内完成了酶促消化过程，在圆盘表面富集了蛋白质成分
此外，我们建立了最佳条件，仅从圆盘上洗脱消化的肽，同时将样品中包含的SDS保留在圆盘上，并以简单的操作和最小的损失实现了样品预处理
通过将AnExSP与轨道阱质谱的数据独立采集(DIA)分析相结合，我们成功地在1微克人类培养细胞蛋白质提取物中检测到大约7000种不同的蛋白质成分
通过在将来建立使用减小尺寸的StageTip的样品预处理条件，AnExSP预处理可以用于单细胞蛋白质组学研究，这是近年来越来越感兴趣的
AnExSP可以在60分钟内消化人体细胞提取物
学分:化学通信，DOI: 10
1039/D1CC05529A AnExSP还可用于预处理通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离的蛋白质，SDS-PAGE通常用于蛋白质实验
与传统的预处理方法相比，AnExSP表现出了优越的性能，尤其是在长链消化肽的检测中
在本研究中，我们将AnExSP和SDS-PAGE与蛋白质复合物的化学交联方法相结合，成功地实现了目标蛋白质复合物的简单纯化和常规方法难以检测的长链交联肽的高效检测
由于其广泛的通用性，AnExSP有望应用于生物样品中痕量蛋白质复合物的高灵敏结构分析方法
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