/图像-1/丙型肝炎病毒灯检测的横向流动检测
侧向流条15的机理
两个引物,FLP和BLP,分别用生物素和FITC预标记
由LAMP反应产生的扩增子包含两种标记的引物,作为由两条灰色线示意性表示的双链DNA
它被添加到样品垫上,并通过毛细管作用向结合物移动
链霉亲和素标记的红色颗粒与扩增子上的生物素(来自FLP引物)结合,一起向测试线移动
试纸条上的抗FITC抗体(Ab)通过其FITC标记(来自BLP引物)在测试线捕获扩增子,形成条带
任何未结合的红色颗粒向控制线移动,在那里它们通过生物素被捕获,形成第二条带
横向流动装置的组装和解释
该装置由水室(1)、连接通道(2)、四个LAMP反应室(3)、通道(4)和侧流条(5)组成
在潜伏期后,两条条带表示阳性反应,一条条带表示阴性反应,没有条带表示无效结果
阳性、阴性、1号和2号样品一式两份
c .横向流动法(上图)与凝胶电泳(中间图)和荧光随时间变化(下图)相比的分析灵敏度
基于每个反应的拷贝数(log10)进行质粒JFH1复制子的系列稀释
黑线表示四分位数范围内的中位数(n = 3个生物学独立实验,每个实验有三个技术重复)
不同的符号用于每个稀释度,以便于可视化(灰色和白色圆盘-4
1、白色锭剂—3
8、反向三角形—3
5、黑色钻石—3
2、灰色圆圈—2
9和白色方块—2
6 log10份/反应,黑盘为阴性对照—去离子水)
荧光随时间的统计分析是使用参数的单向方差分析进行的
F比= 55
56,自由度= 65
****p ≤ 0
0001,位置—阳性丙型肝炎病毒对照,阴性—无模板对照,M—100 bp NEB DNA阶梯,C—对照线,T—试验线
源数据作为源数据文件提供
信用:https://www
自然
com/articles/s 41467-021-27076-z 一种新的丙型肝炎检测方法可以帮助全球抗击这种致命的病毒,该方法使用折纸式的折叠纸来提供快速、准确和负担得起的诊断
这项由格拉斯哥大学的生物医学工程师和病毒学家开发的测试,在大约30分钟内提供了类似于新冠肺炎家庭测试的横向流动结果
在今天发表在《自然通讯》杂志上的一篇新论文中,研究小组描述了他们是如何开发这个系统的
它建立在该大学先前在快速诊断和病毒学方面的突破基础上,以98%的准确率提供结果
丙型肝炎是一种血液传播的病毒,它会损害肝脏,估计会影响全球7000多万人
这种病毒对肝脏的影响是缓慢的,患者可能不会意识到自己被感染了,直到他们因为肝硬化或癌症等并发症而变得严重
如果感染在显著发展之前被发现,可以用低成本、容易获得的药物进行有效治疗
然而,多达80%的病毒携带者直到出现临床并发症时才意识到自己被感染了
因此,全世界每年约有40万人死于丙型肝炎相关疾病,其中许多人本可以通过早期诊断和治疗得到挽救
目前,丙型肝炎感染是在实验室条件下使用两个步骤进行诊断的,即检测血液中是否存在抗体以及检测病毒的核糖核酸或核心抗原
这一过程可能需要大量时间来交付结果,增加了一些接受测试的患者不回来了解结果的可能性
在低收入和中等收入国家,获得检测的机会也很有限,在这些国家,绝大多数丙肝患者生活在那里
虽然近年来已经开发出了能够提供快速结果的更便携的测试,但是它们的准确性可能是有限的,尤其是在不同的人类基因型中
然而,格拉斯哥大学领导的团队的新系统更适合在世界各地使用
它改编自他们开发的一个类似系统,用于快速诊断疟疾,该系统已经在乌干达进行了测试,结果令人鼓舞
该设备使用折纸状的折叠蜡纸为一个被称为环介导等温扩增或LAMP的过程准备样本
纸张折叠的过程使样本能够被处理并输送到试剂盒中的三个小室中,LAMP机器加热该试剂盒并用于检测样本中丙型肝炎RNA的存在
这项技术非常简单,将来有可能通过手指穿刺从患者的血液样本中进行现场输送
这个过程大约需要30分钟
结果通过一个易于阅读的横向流动测试条传递,如妊娠测试或家庭新冠肺炎测试,显示两个阳性结果带和一个阴性结果带
为了测试他们的原型,该团队使用该系统分析了100份来自慢性丙型肝炎患者的匿名血浆样本和另外100份来自丙型肝炎阴性患者的样本,作为对照组
还使用行业标准的雅培实时丙型肝炎检测对样本进行了测试,以确认LAMP结果
LAMP测试提供了98%准确的结果
格拉斯哥大学詹姆斯·瓦特工程学院的乔纳森·库珀教授是该论文的合著者之一
库珀教授说:“世界卫生组织已经发布了快速、准确的诊断检测指南,这有助于应对包括丙型肝炎在内的全球传染病
“我们的疟疾诊断系统是对这一行动呼吁的回应
虽然这测试了患者血液中恶性疟原虫的DNA,恶性疟原虫是一种蚊子传播的寄生虫,会导致疟疾,但我们相信它可以用于其他目的
我们很高兴能够与格拉斯哥大学病毒研究中心的同事合作开发这个系统,用于检测丙型肝炎病毒核酸的存在
该中心是一些世界领先的病毒学家的家,在整个开发过程中得到他们的投入和指导是很棒的
" 格拉斯哥大学病毒研究中心的艾玛·汤姆森教授也是这篇论文的合著者
汤姆森教授说:“对于丙型病毒性肝炎的快速诊断来说,这是一个非常有希望的发展,世卫组织的目标是在2030年之前消除这种疾病
撒哈拉以南非洲地区受病毒影响尤其严重,因此像这样一种便携式快速检测方法可以在识别感染和提供治疗方面提供很大帮助
“我的研究小组的重点领域之一是描述非洲丙型肝炎病毒株的多样性,因此我很高兴与我的生物医学工程同事合作,提供样本并帮助使该测试更适合在广泛的环境中使用
" 该团队的目标是明年在撒哈拉以南非洲的实地试验中使用该系统
该团队的论文题为“环介导等温扩增用于丙型肝炎病毒早期诊断的纸微流控实现”,发表在《自然通讯》上
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